Một đoạn DNA mạch đơn có kích thước 4 kb được lai với một mẫu dò DNA có đánh dấu phóng xạ với kích thước 500bp tạo thành DNA lai như mô tả ở hình Hình 2.1.
22/32
Một đoạn DNA mạch đơn có kích thước 4 kb được lai với một mẫu dò DNA có đánh dấu phóng xạ với kích thước 500bp tạo thành DNA lai như mô tả ở hình Hình 2.1.
ĐemốngnghiệmchứacácphântửDNAlai tươngđươngnhauxửlítheo3cáchsau:(1)Bổsung enzymehelicase;(2)Bổ sungenzymehelicaseđã đunsôi;(3)Bổsungenzymehelicaseđượcđunnóng nhẹ.Tiến hành điện di 3 mẫu DNA thu được sau khi sử lí trên cùng bản gel agarose. Sau đó, sử dụng phương pháp phóng xạ tự ghi để ghi lại hình ảnh. Hình 2.2 mô tả kích thước thang chuẩn dùng để điện di DNAtrên gel agarose.Biếttrênphimphóng xạtự chụpchỉDNAnàocó đánhdấuphóngxạmớihiệntrên phim và enzyme helicase có hoạt tính tối ưu ở nhiệt độ phòng.
Enzymehelicase có tácdụng phávỡ cácliênkết hydrogengiữa2mạchDNA.
HìnhảnhxuấthiệntrênphimphóngxạtựghicủamẫuđiệndiDNAởcách(1)tươngứngvớibăng điện di E trên Hình 2.2.
HìnhảnhxuấthiệntrênphimphóngxạtựghicủamẫuđiệndiDNAởcách(2)tươngứngvớibăng điện di B trên Hình 2.2.
HìnhảnhxuấthiệntrênphimphóngxạtựghicủamẫuđiệndiDNAởcách(3)tươngứngvớibăng điện di D trên Hình 2.2.
HD:
- Enzyme helicase có tác dụng tách DNA mạch kép thành hai mạch đơn, khi bị đun nóng nhẹ sẽ giảmhoạt tính, còn khi đun sôi sẽ bị mất hoạt tính do bị biến tính:
+ Ở ống nghiệm xửlítheo cách (1)enzyme helicase có hoạt tínhtối ưu nênsau xử lícác phân tử DNA lai bị tách thành 2 mạch đơn, một mạch đánh dấu phóng xạ có kích thước 500bp = 0,5kb và một loại mạch không có dấu phóng xạ kích thước 4kb.
+ Ở ống nghiệm xử lí theo cách (2) enzyme helicase mất hoạt tính nên sau xử lí các phân tử DNA lai không bị tách thành 2 mạch đơn do đó trong ống nghiệm chỉ có 1 loại DNA lai chứa phóng xạ 4,5kb.
+ Ở ống nghiệm xử lí theo cách (3) enzyme helicase được đung nóng nhẹ có hoạt tính giảm nên một số phân tửDNAlai bịtách thành2 mạch đơn (mộtmạch đánh dấu phóng xạcó kíchthước500bp =0,5kb và một loại mạch không có dấu phóng xạ kích thước 4kb) còn một số phân tử lai không bị tách.
Chỉ có DNA có đánh dấu phóng xạ mới được hiện trên phim nên trong thí nghiệm này trên phỉm chỉ xuất hiện 2 băng tương ứng với 2 DNA đánh dấu phóng xạ có kích thước - 0,5kb và 4,5kb:
+ Hình ảnh xuất hiện trên phim phóng xạ tự ghi của mẫu điện di DNA ở cách (1) chỉ có một băng kích thước 0,5kb (A).
+ Hình ảnh xuất hiện trên phim phóng xạ tự ghi của mẫu điện di DNA ở cách (2) chỉ có một băng kích thước 4,5kb (B).
+HìnhảnhxuấthiệntrênphimphóngxạtựghicủamẫuđiệndiDNAởcách(3)có2băng0,5kbvà 4,5kb(C).