Để tách dòng một đoạn của gene X mã hóa protein ở tế bào cơ của chuột, các nhà nghiên cứu đã tạo cDNA (DNA tái tổ hợp) dựa trên mRNA trưởng thành được phiên mã từ gene X kiểu dại sử dụng mồi

Đểtáchdòng mộtđoạncủageneX mãhóaproteinởtếbào cơcủachuột,cácnhà nghiêncứu đã tạocDNA(DNAtáitổhợp)dựatrênmRNAtrưởngthànhđượcphiênmãtừgeneXkiểudạisửdụngmồi oligo-dT.Hình7.1thểhiệnsơđồgeneXgồmpromoterP1vàvịtrínhậnbiếtcủacácenzymecắtgiớihạn (M, N, Pvà Q). Hình7.2 thể hiệncấutrúccủavectorpR02023dùngđểnhândòng vàbiểu hiệncDNA củageneX.Trìnhtựnhậnbiết củacácenzyme cắt giớihạnđượcmôtảở Hình7.3. SaukhigắncDNA gene X với vector pR02023, ngườitatiến hành biến nạp sản phẩm vào vi khuẩn E. coli DH5α và nuôi chúngtrênđĩamôitrường1cóchứakhángsinhtetracycline.Sauđó,chuyểntoànbộcáckhuẩnlạctừđĩa 1 sang đĩa 2có chứatetracycline và ampicilin bằng kỹthuật đóngdấu. Kết quảthu được cáckhuẩnlạc nhưHình7.4.KếtquảbiểuhiệngeneXtừplasmidtáitổhợpchothấymộtdòngplasmidtáitổhợpchứa gene X tạo protein mất chức năng. Kết quả giải trình tự gene X từ dòng plasmid này sử dụng mồi ps2 (Hình7.1)đãxácđịnhmộtđộtbiếnđiểmsovớikiểudại.Vịtríđộtbiếnthuộcđoạntrìnhtựbiểudiễntrên gelgiảitrìnhtựtheophươngphápdideoxytươngứng vớicác amino acidtừ16đến18(Hình7.5).Ghichú:UTR:vùngkhôngdịchmã;AmpR:gene khángampicilin;TetR:gene khángtetracycline1.  Nêu các điều kiện của thể truyền (vector chuyển gene).

2.  Hãy viết trình tự của đoạn mRNA tương ứng với các amino acid từ 16 đến 18 của gene X đột biến. Biết protein kiểu dại có trình tự amino acid N-met16 - trp17 - met18 - C, các bộ ba AUG, UGG và UAG lần lượt mã hóa Met, Trp và mã kết thúc. Hãy xác định vị trí nucleotide trên trình tự của gene X bị đột biến và loại đột biến đã xảy ra.

3.  Cho rằng mRNA trưởng thành có chứa toàn bộ các exon và vùng UTR theo thứ tự ban đầu. Xác định các enzyme cắt giới hạn phù hợp để có thể nhân dòng và biểu hiện đoạn gene đích sử dụng vector pR02023.

4.  Hãy xác định các khuẩn lạc nhiều khả năng có chứa plasmid tái tổ hợp mang đoạn gene đích. Giải thích.