Trong quá trình tái bản ADN ở sinh vật nhân sơ, enzim nối ligaza có chức năng:

Nối các đoạn Okazaki với nhau.

Tháo xoắn phân tử ADN.

Tổng hợp đoạn ARN mồi có nhóm 3'- OH.

Nhận biết vị trí khởi đầu của đoạn ADN cần nhân đôi.