Một nhà khoa học tiến hành thiết kế vector pUC19 có nguồn gốc từ vi khuẩn E. coli bằng cách chèn một
3/3
Một nhà khoa học tiến hành thiết kế vector pUC19 có nguồn gốc từ vi khuẩn E. coli bằng cách chèn một đoạn polylinker vào gene lacZ+ mã hoá cho enzyme β-galactosidase trên plasmid (Hình 2). Enzyme β-galactosidase có khả năng chuyển hóa X-Gal (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-galactopyranoside, một hợp chất nhân tạo không màu) thành một hợp chất có màu xanh, đặc tính này được sử dụng để chọn lọc dòng vi khuẩn chứa plasmid tái tổ hợp dựa vào quan sát khuẩn lạc trong môi trường chứa thuốc kháng sinh ampicillin (Hình 3).
a) Nhà khoa học này chèn đoạn polylinker vào gene lacZ+ nhằm mục đích gì?
b) Bằng cách nào để xác định được dòng vi khuẩn mang plasmid tái tổ hợp khi quan sát khuẩn lạc?
a) Việc chèn đoạn polylinker vào gene lacZ+ nhằm mục đích nhận biết vi khuẩn mang plasmid tái tổ hợp. Gene cần chuyển được gắn vào vị trí đoạn polylinker nên sẽ phá vỡ cấu trúc của gene lacZ+ dẫn đến vi khuẩn không tổng hợp được enzyme β-galactosidase.
b) Vi khuẩn mang plasmid tái tổ hợp không có khả năng tổng hợp enzyme β-galactosidase nên không thể chuyển hóa X-Gal thành chất màu xanh nên sẽ xuất hiện khuẩn lạc màu trắng.