Cơ chế tác dụng của thuốc Methotretxate:

Tranh chấp với các chất chuyển hóa bình thường làm ức chế quá trình tổng hợp enzyme của tế bào

Tổng hợp nên những chất không hoạt động làm thay đổi cấu trúc DNA

Làm rối loạn tổng hợp acid nhân, protein tế bào dẫn đến sự ngừng phát triển và nhân lên của tế bào ung thư

Ức chế sự cạnh tranh với dihydrofolate reductasee làm giảm tổng hợp các base nito cần cho sự tổng hợp DNA và RNA